傳代

 

1、貼壁細(xì)胞傳代時(shí)，先用消化液潤(rùn)洗一遍；棄掉后，再加入適量消化液置于孵箱或鏡下觀察消化；當(dāng)細(xì)胞變圓，彼此之間產(chǎn)生空隙，加入等量或大量的培養(yǎng)基終止消化，培養(yǎng)基中的血清可以抑制胰蛋白酶的活性。

2、這里我沒有明確提到胰蛋白酶的濃度，并不是說濃度越高越好。胰蛋白酶底物的特異性差，會(huì)破壞細(xì)胞膜成分。PH8.0，37度環(huán)境下，消化液的消化能力是很強(qiáng)的。培養(yǎng)基中的血清會(huì)降低胰酶的消化能力，所以每次消化前，也要用PBS反復(fù)沖洗干凈培養(yǎng)皿。日常用的比較多的消化液濃度：a)0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

b)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA

c)0.25%胰蛋白酶

3、傳代后如果細(xì)胞不貼壁，可能的原因是胰蛋白酶消化過度或者沒有清洗干凈EDTA。

4、懸浮細(xì)胞傳代時(shí)，正常收集細(xì)胞、離心濃縮、用培養(yǎng)基重懸就可以了。懸浮細(xì)胞每次換液都需要離心重懸，但是由于懸浮細(xì)胞一般會(huì)處于單細(xì)胞層生長(zhǎng)，有的時(shí)候生長(zhǎng)速度很快，重懸后如果不晃動(dòng)培養(yǎng)皿，就會(huì)看到細(xì)胞成團(tuán)；如果經(jīng)常顯示懸浮細(xì)胞大量抱團(tuán)生長(zhǎng)，也有可能是培養(yǎng)基中的血清問題、或者鈣鎂離子濃度的變化造成了細(xì)胞間的粘附力改變。

科研實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級(jí)胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞，如：干細(xì)胞、肝細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

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